V8蛋白酶

EC：3.4.21.19
全名: 序列分析純V8蛋白酶；金黃色葡萄球菌V8蛋白酶
別名: V8蛋白酶；谷氨酰胺內(nèi)切酶；天冬酰胺內(nèi)切酶
儲存條件：凍干粉，2-8℃
來源：基因工程生產(chǎn)，大腸桿菌表達(dá)。
 
1.產(chǎn)品簡介
V8蛋白酶屬于絲氨酸蛋白酶家族，能特異水解谷氨酸或天冬氨酸殘基羧基側(cè)肽鍵。在pH 7.8的NH₄HCO₃和pH 4.0的CH₃COONH₄緩沖液中識別并切割Glu羧基端肽鍵，在pH 7.8的磷酸鹽緩沖液中識別并切割Glu或Asp羧基端肽鍵，且對Glu的水解速率高于Asp。V8蛋白酶在pH4.0-10.0之間均有活性，最適pH為8.0-8.5。在進(jìn)行蛋白質(zhì)酶切測序、肽圖譜分析和肽質(zhì)量指紋圖譜分析中使用時，可以單獨(dú)使用或與其他蛋白酶混合使用。V8蛋白酶的抑制劑有二異丙基氟磷酸（DFP）、α2- 巨球蛋白和Nα-P-甲苯磺?；?L-賴氨酸氯甲基酮（TLCK）。
 
2.產(chǎn)品特性

來源	重組大腸桿菌
產(chǎn)品外觀	白色、類白色、類黃色粉末
比活	≥ 5.0 U /mg pro.
蛋白電泳	單一主條帶
分子量	24.0±2.4 kDa

單位定義：在25℃，pH7.8的條件下，每分鐘催化底物（Z-Phe-Leu-Glu-4-nitranilide）生成1μmol對硝基苯胺（4-nitroaniline）所需要的酶量為一個酶活性單位。

3.儲存和運(yùn)輸穩(wěn)定性
儲存穩(wěn)定性：重組V8蛋白酶凍干粉存于2-8℃，24個月穩(wěn)定；
溶解后穩(wěn)定性：用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于-20℃ 以下（1mg/ml），6個月穩(wěn)定；用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于4℃（1mg/ml，無菌），2個月穩(wěn)定；用50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于25℃或37℃（0.5mg/ml）12h，活性可維持85%以上；溶解后溶液可反復(fù)凍融10次無活性損失。
運(yùn)輸穩(wěn)定性：藍(lán)冰保溫運(yùn)輸，活性穩(wěn)定。
 
4.推薦使用方法
1）使用前注意
可按使用量分裝以最大限度避免污染或自切。
2）目的蛋白溶解
用酶切buffer溶解目的蛋白，例如25-50mM NH₄HCO₃ pH7.8，若溶解度不好對目的蛋白變性，添加尿素、SDS、DTT或加熱。尿素和SDS對V8蛋白酶的影響見表一。
3）酶切
V8蛋白酶和目的蛋白推薦比例為1/20-1/100（W/W)，25℃或37℃酶切2-18h。
 
表一：V8蛋白酶在含有不同濃度變性劑，尿素25℃2h，SDS25℃12h的穩(wěn)定性
（注：V8蛋白酶0.5mg/ml，50mM Tris-HCl pH8.0）

變性劑	濃度	殘余酶活
不添加	0	100%
尿素	2M	95%
	5M	12%
	8M	0
SDS	0.1%	90%
	0.5%	80%
	1%	50%

 
5.產(chǎn)品優(yōu)勢
序列分析純蛋白酶：特異性高，穩(wěn)定性好。
無動物源性：重組生產(chǎn)，無外源性的病毒污染，生產(chǎn)過程不使用任何動物源原料。
質(zhì)量穩(wěn)定：批量生產(chǎn)，可保證穩(wěn)定連續(xù)的批次生產(chǎn)；產(chǎn) 品批次間無差異，質(zhì)量穩(wěn)定。
純度高：比活高；宿主蛋白殘留小于生物制品限度要求。
凍干粉：易于儲存和運(yùn)輸。
符合法規(guī)要求：生產(chǎn)設(shè)備和生產(chǎn)環(huán)境符合相關(guān)法規(guī)要求，生產(chǎn)過程完全遵循NSF ISO 9001:2015質(zhì)量體系并符合GMP指導(dǎo)原則。
質(zhì)量文件完整：按客戶需求，可提供相關(guān)法規(guī)支持文件。
 
6.相關(guān)產(chǎn)品
重組腸激酶；
序列分析純羧肽酶B；
序列分析純胰蛋白酶；
序列分析純糜蛋白酶。